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分子生物学服务

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分子生物学服务


现代分子生物学技术已经成为科学研究领域有力的工具。但是，繁杂和重复性的工作花费了科研人员太多不必要的宝贵时间。将这些工作交给专业团队就能够大大节省实验人员的时间，提高工作效率，为实验制定严格时间进度而不会受其它因素影响，科研人员将会有更多的时间和精力从事创新性的工作。现代分子生物学技术已经成为科学研究领域有力的工具。但是，繁杂和重复性的工作花费了科研人员太多不必要的宝贵时间。将这些工作交给专业团队就能够大大节省实验人员的时间，提高工作效率，为实验制定严格时间进度而不会受其它因素影响，科研人员将会有更多的时间和精力从事创新性的工作。盛朗赛生物可为客户提供以下分子生物学服务：大规模的核酸提取及纯化，PCR克隆及亚克隆，RT-PCR, 载体构建，质粒制备，SNP检测及数据分析等等。凭借其丰富的生物技术服务经验，盛朗赛生物的分子生物学团队完全可以为客户解决任何技术难题。


定制类服务
引物合成服务 DNA合成技术在生命科学领域应用极为广泛， 如PCR扩增、 DNA 杂交、基因合成及 DNA 测序等。我公司能及时为客户提供高质量、多种类的引物合成服务。
基因合成服务 基因合成与寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最大长度仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，长度为10kb 甚至更长；尤其是遇到以下的情况: (无法以常规实验手段从自然界中得到的基因，或者研究人员通过自己的意愿设计的基因序列，或者对已知基因序列进行大量密码子优化重排,以期达到对该基因进行高效表达或获得新的生物特性)，必须通过全基因和合成的途径满足研究中的需要。
基因组DNA/总RNA提取 从细胞中提取基因组DNA和总RNA后，仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。除去这些“杂质”的过程，也就是核酸提纯过程。在核酸的分离纯化时，为防止核酸大分子的变性降解，必须在0～4℃的低温条件下操作。核酸酶的水解作用，是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍，现普遍采用加入去污剂或加入EDTA、8-羟基喹啉、柠檬酸钠以除去核酸酶的激活剂Mg2+，就可以抑制核酸酶的活性，保证在提纯过程中核酸大分子的完整。
质粒抽提服务 质粒DNA质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒作为低等生物体内的最小遗传单位，具有分子量小、复制速度快等诸多优点，是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。
高质量的质粒在基因治疗、疫苗和真核细胞转染等实验研究中是必要的。质粒抽提过程中，由于革兰氏阴性细菌自溶或其他原因的破坏，会从其细胞壁上释放出毒性脂多糖，称内毒素。它会影响细胞转染的效率；可以影响转染过程中质粒DNA的吸收；也会激活免疫细胞中的非特异性免疫反应，干扰转染结果，质粒的纯度及内毒素含量很大程度上决定着着实验的成败。
cDNA基因库克隆基因 现代生物学试验中，得到目的基因的途径有很多种，例如全基因合成，反转录RT-PCR，基因组模板PCR等，在分子生物学技术日益成熟的今天，不再是困扰科研工作者的难题了，但是，这些低端技术含量的工作，需要耗费大量的精力和时间。我们拥有人和小鼠的cDNA文库，库存的基因数量高达2万余种，基本上涵盖了所有的已知基因，您只要提供GeneBank Accession Numbers，我们可以快速的提供包含cDNA的质粒。同时我们也可以帮助克隆到任意的表达载体中，一步到位，节省宝贵的科研时间。
反转录RT服务 在进行目的蛋白的表达、构建表达载体等实验时，通常需要获得一段目的基因。我们可以根据您提供的已知参考序列（NCBI上已发表)，以基因组DNA或总RNA为模板，获取您所需要的某个区域的一段基因。
定点突变 除了全基因合成之外，科研工作者可以通过各种方法得到目的基因，例如RT-PCR反转录调取目的基因，从基因组DNA直接PCR得到目标基因，从已有的ORF库中直接获得等等，但事实上，获得的基因序列可能并不是需要的最终序列，或许在某些地方有部分碱基不符合您的实验要求。比如有部分多余的碱基，或者丢失了部分碱基，或者个别碱基有突变。要得到最终符合要求的序列，需要对序列进行特定位置修改。另外，为了研究某些特定碱基或氨基酸变化多生物性质的影响，定点突变操作必不可少。
PCR克隆及亚克隆 从已经获得的DNA材料中，使用限制性内切酶或PCR等手段将目标DNA片段酶切下来或重新PCR扩增出来，再克隆到另外的载体中的实验方法，称之为亚克隆操作，是分子生物学实验中必不可少的实验手段。随着亚克隆片段大小的增加，亚克隆的难度相应增加，使用酶切然后酶连的方法困难越来越大。经过基因工程技术的不断进步，市面上也出现了相应的产品，可以不需要借助酶切位点，通过同源重组的方法进行克隆，大大提高PCR亚克隆操作的实验能力。
TA克隆服务 在PCR反应体系中，一般聚合酶具有末端转移的活性，通常在3'加上A，而TA克隆法是将PCR片断与一个具有3'-T突出的载体DNA连接起来，因此TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，也不需在PCR扩增产物上加接头或平端处理处理，即可通过蓝白筛选的办法直接进行TA克隆。
cDNA末端快速扩增 根据杂交或cDNA文库构建、或文献支持等方法，我们可以获得基因的一段已知序列，为了得到全长的cDNA，可以利用 3'-RACE 方法获得该基因的 3' 端序列，或利用 5'-RACE 方法获得该基因的 5'端序列。
cDNA文库构建 提供基于SMART方法的cDNA文库（cDNA Library）构建服务。使用的载体为pDNR-LIB。在连接、克隆cDNA片段时，进行了cDNA片段的长度筛选，基本上去除了400 bp以下的cDNA短片段，保证了较长cDNA片段的克隆效率。



检测类服务
Southern Blot印迹杂交检测 Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法。其原理为利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相应结构的DIG标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。
Northern Blot印迹杂交检测 Northern blot印迹杂交是DNA/RNA的杂交，它是一项用于检测特异性RNA的技术，RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，凝胶分离后的RNA通过southern印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。
DNA测序服务 采用新型的ABI 3730XL测序仪，保证高质量的测序反应，每个反应准确读取碱基数在800bp左右。通常情况下，3－5个工作日内通过E-mail发送测序结果（大量样品除外，结果较多的附送光盘）。测序结果不会透漏给第三方，我们将为您严格保密。
荧光定量PCR服务 实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR不仅实现真正实现了绝对定量，而且具有灵敏度和特异性、高能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合，荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景十分广阔。
菌种鉴定 通过DNA测序对微生物进行物种鉴定（菌种鉴定）是比传统生化鉴定更先进的鉴定方法。DNA测序不依赖菌种本身特点，对所有菌种均可使用。比传统生化鉴定更加快速，准确。钟鼎生物技术公司提供的微生物物种鉴定服务包括细菌16srDNA鉴定和真菌26srDNA鉴定、真菌ITS鉴定，通过PCR扩增16SrDNA或26SrDNA片段，测序后在GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种菌种。
SNP分型技术服务 单核苷酸多态性single nucleotide polymorphism(SNP),个体间基因组DNA序列同一位置单个核苷酸变异(替代、插入或缺失)所引起的多态性。 不同物种、个体基因组DNA序列同一位置上的单个核苷酸存在差别的现象。这种差别的基因座，DNA序列等可作为基因组作图的标志。人基因组上平均约每1000个核苷酸即可能出现1个单核苷酸多态性的变化，其中有些单核苷酸多态性可能与疾病有关，但也可能大多数与疾病无关。单核苷酸多态性是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据。
EMSA 电泳/凝胶迁移率技术服务 EMSA实验的原理是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合，依据实验需要，设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物，通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析，钟鼎生物提供的EMSA实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay 凝胶/电泳迁移率实验）基于生物素标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合，设计合理、科学的实验方案，为客户提供验证性的EMSA，竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super-shift EMSA）实验服务。